Цель спецкурса: ознакомить студентов с основными гистологическими методиками, используемыми в зоологических исследованиях.
Спецкурс ориентирован на студентов третьего курса бакалавриата и проводится в весеннем семестре. Спецкурс включает лекции, практические занятия и самостоятельную работу. Форма итоговой отчётности — зачёт.
Программа спецкурса
ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ЗАНЯТИЯ
Лекция 1.
Задачи микротехники.
Подготовка материала:
- Фиксация. Общие правила фиксации морфологического материала. Основные способы фиксации. Цели и методы фиксации. Типы фиксирующих веществ. Основные фиксирующие составы и методы их изготовления.
- Декальцинация. Составы для декальцинации и принципы их использования.
Лекция 2.
Подготовка материала для изготовления гистологических срезов на микротоме:
- Обезвоживание препаратов. Проводка по спиртам.
- Уплотнение препаратов
- Заливка материала в заливочную среду. Основные заливочные среды (парафин, целлоидин, целлоидин-парафин, желатина, гистомикс).
Лекция 3.
Микротомы. Типы микротомов (санный микротом, падающий микротом Мино). Ножи для резки.
Техника изготовления срезов.
Подготовка срезов к окрашиванию.
Лекция 4.
Окрашивание препаратов:
- Группы гистологических красителей.
- Химические свойства гистологических красителей.
- Правила окрашивания препаратов.
- Основные методы окрашивания (окраска по Маллори).
- Заключение срезов в бальзам
Лекция 5.
Определение возраста позвоночных. Биологические основы формирования возрастных колец в минеральных элементах скелета. Способы визуализации возрастных колец (просветление, изготовление шлифов, изготовление срезов). Методика изготовления декальцинированных срезов трубчатых костей наземных четвероногих. Основные принципы работы микротома с замораживающим столиком. Окраска препаратов гематоксилином Эрлиха.
Лекция 6.
Основы строения волос. Типы кутикулы. Способы изготовления микропрепаратов волос. Отпечатки волос для изучения на световом микроскопе. Методика изготовления отпечатков на лаке. Основы определения видов млекопитающих по отпечаткам волос.
Лекция 7.
История реконструкций гистологических срезов. Парафиновые реконструкции.
Основы компьютерной 3-D реконструкции структур по гистологическим срезам. Последовательность действий для компьютерной реконструкции. Фотографирование срезов. Предварительная обработка фотографий. Объединение изображений в стек. Обводка контуров фокальных областей. Программы для трехмерной реконструкции по гистологическим срезам.
Томография как метод визуализации внутреннего строения без разрушения препаратов. Принцип работы компьютерного и магнитно-резонансного томографов. Устройство компьютерного томографа. Принципы сканирования объектов на медицинских и промышленных томографах. Разрешение изображения при компьютерной томографии. Демонстрация реконструированных моделей.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ЗАНЯТИЯ
Практическое занятие 1. Выбор зоологического материала.
Практическое занятие 2. Подготовка материала к заливке в гистомикс.
Практическое занятие 3. Заливка материала в парафин, пробная резка на микротоме
Практическое занятие 4. Резка на микротоме основного объекта, наклеивание срезов на стекла
Практическое занятие 5. Окрашивание срезов, заключение срезов в бальзам
Практическое занятие 6. Просмотр гистологических препаратов под микроскопом, определение структур исследуемых объектов
Практическое занятие 7. Изготовление поперечных срезов костей или зубов на микротоме с замораживающим столиком
Практическое занятие 8. Изготовление отпечатков кутикулы волос различных млекопитающих
Практическое занятие 9. Проведение компьютерной реконструкции по самостоятельно изготовленным срезам
Литература
- Валовая М.А., Кавтарадзе Д.Н.: Микротехника (Правила, приемы, искусство, эксперимент) М, 1993.
- Елисеев В.Г. Основы гистологии и гистологической техники М, 1967
- Роскин Г.И., Левинсон Л.Б Микроскопическая техника М, 1957
- Ромейс Б. Микроскопическая техника М, 1954 (справочник)
- Чернова О.Ф., Целикова Т.Н. Атлас волос млекопитающих. (Тонкая структура остевых волос и игл в сканирующем электронном микроскопе). М, 2004.
Составитель – кандидат биологических наук, научный сотрудник Ирина Борисовна Солдатова